石蜡切片故障排除

  1. 确认 80°C 循环水浴的温度保持恒定。此温度的波动会导致较差的结果。用于表面绝缘的聚丙烯球可通过 VWR 目录编号 26396-466 购买。

    要重新处理同一张玻片:
  2. 取下盖玻片,并将载玻片依次置于一系列 (70%、85%、100%) 乙醇溶液中各 1 分钟。使载玻片干燥,并重新放回蛋白酶溶液中 10-45 分钟,具体取决于消化的水平。请勿再次对载玻片进行福尔马林固定。在 73°C 下再变性 6 分钟并在 37°C 下杂交过夜。在极端情况下,您可能需要重复从 80°C 硫氰酸钠开始直至完成蛋白酶溶液变性的步骤并再次杂交。
  3. 如果切片未经 24-48 小时的福尔马林固定,则难以达到适当的消化水平。
  4. 确认蛋白酶缓冲液的 pH 值为 2。否则,调节 pH 值以使酶将重新获得活性。
  5. 在加入蛋白酶之前,确保蛋白酶缓冲液已加热至 37°C。
  6. 在 72°C 的 2XSSC/0.3% NP-40 中洗涤石蜡切片 2 分钟。不建议在此之后进行室温洗涤。
  7. 如果预处理仍然不起作用,您可能需要切换到更极端的预处理。请联系您当地的技术服务办事处。

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