石蜡预处理

简短版方案不应替代试剂盒说明书。

预期用途

制备固定在带正电荷载玻片上的石蜡包埋组织切片,适合采用 Vysis 探针的荧光原位杂交 (FISH)。

提供的试剂

试剂 数量 成分 储存
预处理溶液 5 x 50 mL 硫氰酸钠 (NaSCN) 2 至 25°C
蛋白酶缓冲液 5 x 50 mL NaCl,pH 2.0 2 至 25°C
洗涤缓冲液 5 x 250 毫克 2X SSC, pH 7.0 2 至 25°C
蛋白酶 5 x 25 毫克 2500 - 3000 U/毫克蛋白酶,冻干粉 -20 °C

制备标本玻片(可选)

注意:使用福尔马林固定了 24 - 48 小时的标本。

  1. 用切片机切取 4-5 µm 厚的石蜡切片。
  2. 将切片漂浮于 40 ºC 的纯化水(即三蒸水)的水浴中。
  3. 在带正电荷的载玻片上固定切片。
  4. 风干玻片。
  5. 将玻片在 56 ºC 温度下烘烤过夜。

将玻片脱蜡

  1. 在室温下将玻片浸入 Hemo-De 中 10 分钟。
  2. 重复步骤 1 两次,每次均使用新鲜的 Hemo-De。
  3. 将玻片置于室温下的 100% 无水乙醇中脱水 5 分钟。重复。
  4. 风干玻片或者将玻片置于 45 - 50 °C 的玻片加热器中 2 - 5 分钟。

预处理玻片

  1. 将玻片浸入 0.2N 盐酸中 20 分钟。
  2. 将玻片浸入纯化水中 3 分钟。
  3. 将玻片浸入洗涤缓冲液中 3 分钟。
  4. 将玻片浸入 80 ºC 的预处理溶液中 30 分钟。可在 Coplin 染色缸的每个槽中背靠背放置两张玻片,两端的槽中放置一张玻片。对于两端的玻片,带有组织部分的玻片一侧必须朝向染色缸的中心。 
  5. 将玻片浸入纯化水中 1 分钟。
  6. 将玻片浸入洗涤缓冲液中 5 分钟。使用装有洗涤缓冲液的第二个染色缸重复。

用蛋白酶处理玻片

  1. 将玻片从装有洗涤缓冲液的第二个染色缸中取出。
  2. 用纸巾吸干玻片边缘,以去除多余缓冲液。
  3. 将玻片浸入 37 ºC 的蛋白酶溶液中 10 分钟。加入 25 毫克(一管)蛋白酶前,确保缓冲液的温度为 37 ± 1 ºC。
  4. 将玻片浸入洗涤缓冲液中 5 分钟。使用装有洗涤缓冲液的第二个染色缸重复。
  5. 将玻片置于 45 - 50 °C 的玻片加热器中 2 - 5 分钟以使之干燥。

固定样本

  1. 将玻片浸入室温下 10% 缓冲福尔马林溶液中 10 分钟。
  2. 将玻片浸入洗涤缓冲液中 5 分钟。使用装有洗涤缓冲液的第二个染色缸重复。
  3. 将玻片置于 45 - 50 °C 的玻片加热器中 2 - 5 分钟以使之干燥。
  4. 随后按照相应的 Vysis 探针方案继续进行。

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