实验室设备,试剂

实验室设备 - 试剂

所需材料

 

进行 FISH 测定需要以下辅助材料、试剂和设备。

  • 100% 乙醇 (EtOH)
  • 纯化水(蒸馏水或去离子水)
  • 12N HCl(用于调节洗涤溶液的 pH 值)
  • 1N NaOH(用于调节洗涤溶液的 pH 值)
  • 20X SSC (500 g)(Vysis 订购编号 32-804850)
  • NP-40(Vysis 订购编号 32-804818)
  • 玻璃 Coplin 染色缸
  • 经过校准的温度计
  • DAPI I 复染剂(Vysis 订购编号 30-804830)
  • DAPI II 复染剂(Vysis 订购编号 30-804831)
  • 镊子
  • 甲酰胺,超纯等级(Vysis 订购编号 US75828)
  • 刻度量筒 1000 mL
  • 磁力搅拌器
  • 甲醇(用于玻片制备)
  • 微量离心机
  • 1-10 µL 容量的微升移液器吸头
  • 1-10 µL 容量的微升移液器
  • pH 计
  • 预清洁的玻璃显微镜载玻片
  • 纯化水
  • 定时器
  • 涡旋混合器
  • 水浴(37 和 72 °C)

预处理试剂

  • 石蜡预处理试剂盒 I (32-801200)
  • 石蜡预处理试剂盒 II (32-801210)
  • 石蜡预处理试剂盒 III (32-801230)

  

 
 
 
 
制备试剂

注意:当说明中有要求时,在室温下测量这些溶液的 pH 值。除非另行注明,否则请使用带有玻璃电极的 pH 计。

 

20X SSC 溶液

 

将 132 克 20X SSC 在 400 mL 纯化水中彻底混合。测量 pH 值,并用 HCl 调节至 pH 5.3。添加纯化水,使最终体积达到 500 mL。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

 2X SSC 溶液

 

将 100 mL 20X SSC (pH 5.3) 充分混合于 850 mL 纯化水中。测量 pH 值,并用 NaOH 调节至 pH 7.0±0.2。添加纯化水,使最终体积达到 1 升。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

变性溶液(70% 甲酰胺/2X SSC)

 

将 49 mL 超纯甲酰胺、7 mL 20X SSC (pH 5.3) 和 14 mL 纯化水在一个玻璃 Coplin 染色缸内充分混合。使用 pH 试纸测量 pH 值以确认 pH 值为 7.0-8.0。两次使用之间,在 2-8 °C 下避光贮存。7 天后丢弃。

 

0.4X SSC/0.3% NP-40 洗涤溶液

 

将 20 mL 20X SSC (pH 5.3) 充分混合于 950 mL 纯化水中。添加 3 mL NP-40。充分混合,直至 NP-40 完全溶解。测量 pH 值,并用 NaOH 调节 pH 值至 7.0-7.5。添加纯化水,使溶液的最终体积达到 1 升。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

2X SSC/0.1% NP-40 洗涤溶液

 

将 100 mL 20X SSC (pH 5.3) 充分混合于 850 mL 纯化水中。添加 1 mL NP-40。测量 pH 值,并用 NaOH 调节至 pH 7.0±0.2。添加纯化水,使最终体积达到 1 升。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

乙醇溶液(70%、85%、100%)

 

用纯化水制备 100% 乙醇的体积比稀释溶液。两次使用之间,在室温下严格避光贮存。6 个月后弃置储备溶液。

 

PBS

 

通过用 180 mL 纯化水稀释 20 mL PBS 10X 来制备 PBS。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

RNA 酶 A 的储备溶液和工作溶液

 

在 2X SSC 中制备 10 毫克/mL 的 RNA 酶 A 储备溶液(不含 DNA 酶)。如果 RNA 酶未被标记为不含 DNA 酶,则要将 RNA 酶溶液置于沸水浴中 10 分钟以使 DNA 酶失活。等分至 10 µL 体积,并在 -20 °C 下贮存于加盖的 1.0 mL 微量离心管中。在使用时,通过解冻离心管中的 RNA 酶储备溶液 (10 毫克/mL) 并将 990 µL 2X SSC (pH 7.0-7.4) 直接添加至管内的 10 µL 溶液来制备 RNA 酶工作溶液。涡旋混合。不要反复冻融。用后丢弃。

 

胃蛋白酶的储备溶液和工作溶液

 

通过将 0.1 克胃蛋白酶混入 1 mL 水(预热至 37 °C)中来制备 10% 胃蛋白酶储备溶液。等分至 35 µL 体积,并在 -20 °C 下贮存,直到将要使用。在将要使用时需制备 0.005% 胃蛋白酶工作溶液,即将 35 µL 10% 胃蛋白酶储备溶液混合入在 Coplin 染色缸内(使用 37 °C 水浴)预热至 37 °C 的 69.3 mL 纯化水和 0.7 mL 1.0 N HCl 的混合溶液。

 

甲醛固定溶液

 

将 57.6 mL 纯化水、3.5 mL 1M MgCl2、7 mL 10X PBS 和 1.89 mL 37% 甲醛混合在一起。充分混合。置于一个 Coplin 染色缸内。每天制备新鲜溶液。

 
 
 
 

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