实验室设备,试剂

实验室设备 - 试剂

所需材料

 

进行 FISH 测定需要以下辅助材料、试剂和设备。

  • 100% 乙醇 (EtOH)
  • 纯化水(蒸馏水或去离子水)
  • 12N HCl(用于调节洗涤溶液的 pH 值)
  • 1N NaOH(用于调节洗涤溶液的 pH 值)
  • 20X SSC (500 g)(Vysis 订购编号 32-804850)
  • NP-40(Vysis 订购编号 32-804818)
  • 玻璃 Coplin 染色缸
  • 经过校准的温度计
  • DAPI I 复染剂(Vysis 订购编号 30-804830)
  • DAPI II 复染剂(Vysis 订购编号 30-804831)
  • 镊子
  • 甲酰胺,超纯等级(Vysis 订购编号 US75828)
  • 刻度量筒 1000 mL
  • 磁力搅拌器
  • 甲醇(用于玻片制备)
  • 微量离心机
  • 1-10 µL 容量的微升移液器吸头
  • 1-10 µL 容量的微升移液器
  • pH 计
  • 预清洁的玻璃显微镜载玻片
  • 纯化水
  • 定时器
  • 涡旋混合器
  • 水浴(37 和 72 °C)

预处理试剂

  • 石蜡预处理试剂盒 I (32-801200)
  • 石蜡预处理试剂盒 II (32-801210)
  • 石蜡预处理试剂盒 III (32-801230)

  

 
 
 
 
制备试剂

注意:当说明中有要求时,在室温下测量这些溶液的 pH 值。除非另行注明,否则请使用带有玻璃电极的 pH 计。

 

20X SSC 溶液

 

将 132 克 20X SSC 在 400 mL 纯化水中彻底混合。测量 pH 值,并用 HCl 调节至 pH 5.3。添加纯化水,使最终体积达到 500 mL。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

 2X SSC 溶液

 

将 100 mL 20X SSC (pH 5.3) 充分混合于 850 mL 纯化水中。测量 pH 值,并用 NaOH 调节至 pH 7.0±0.2。添加纯化水,使最终体积达到 1 升。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

变性溶液(70% 甲酰胺/2X SSC)

 

将 49 mL 超纯甲酰胺、7 mL 20X SSC (pH 5.3) 和 14 mL 纯化水在一个玻璃 Coplin 染色缸内充分混合。使用 pH 试纸测量 pH 值以确认 pH 值为 7.0-8.0。两次使用之间,在 2-8 °C 下避光贮存。7 天后丢弃。

 

0.4X SSC/0.3% NP-40 洗涤溶液

 

将 20 mL 20X SSC (pH 5.3) 充分混合于 950 mL 纯化水中。添加 3 mL NP-40。充分混合,直至 NP-40 完全溶解。测量 pH 值,并用 NaOH 调节 pH 值至 7.0-7.5。添加纯化水,使溶液的最终体积达到 1 升。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

2X SSC/0.1% NP-40 洗涤溶液

 

将 100 mL 20X SSC (pH 5.3) 充分混合于 850 mL 纯化水中。添加 1 mL NP-40。测量 pH 值,并用 NaOH 调节至 pH 7.0±0.2。添加纯化水,使最终体积达到 1 升。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

乙醇溶液(70%、85%、100%)

 

用纯化水制备 100% 乙醇的体积比稀释溶液。两次使用之间,在室温下严格避光贮存。6 个月后弃置储备溶液。

 

PBS

 

通过用 180 mL 纯化水稀释 20 mL PBS 10X 来制备 PBS。在室温下储存。在 6 个月后丢弃储备溶液,或者(更短时间内)在溶液出现浑浊或受污染时丢弃溶液。

 

RNA 酶 A 的储备溶液和工作溶液

 

在 2X SSC 中制备 10 毫克/mL 的 RNA 酶 A 储备溶液(不含 DNA 酶)。如果 RNA 酶未被标记为不含 DNA 酶,则要将 RNA 酶溶液置于沸水浴中 10 分钟以使 DNA 酶失活。等分至 10 µL 体积,并在 -20 °C 下贮存于加盖的 1.0 mL 微量离心管中。在使用时,通过解冻离心管中的 RNA 酶储备溶液 (10 毫克/mL) 并将 990 µL 2X SSC (pH 7.0-7.4) 直接添加至管内的 10 µL 溶液来制备 RNA 酶工作溶液。涡旋混合。不要反复冻融。用后丢弃。

 

胃蛋白酶的储备溶液和工作溶液

 

通过将 0.1 克胃蛋白酶混入 1 mL 水(预热至 37 °C)中来制备 10% 胃蛋白酶储备溶液。等分至 35 µL 体积,并在 -20 °C 下贮存,直到将要使用。在将要使用时需制备 0.005% 胃蛋白酶工作溶液,即将 35 µL 10% 胃蛋白酶储备溶液混合入在 Coplin 染色缸内(使用 37 °C 水浴)预热至 37 °C 的 69.3 mL 纯化水和 0.7 mL 1.0 N HCl 的混合溶液。

 

甲醛固定溶液

 

将 57.6 mL 纯化水、3.5 mL 1M MgCl2、7 mL 10X PBS 和 1.89 mL 37% 甲醛混合在一起。充分混合。置于一个 Coplin 染色缸内。每天制备新鲜溶液。

 
 
 
 

You are about to exit the Abbott family of websites for a 3rd party website

Links which take you out of Abbott worldwide websites are not under the control of Abbott, and Abbott is not responsible for the contents of any such site or any further links from such site. Abbott is providing these links to you only as a convenience, and the inclusion of any link does not imply endorsement of the linked site by Abbott. The website that you have requested also may not be optimised for your screen size.

Do you wish to continue and exit this website?

Yes No

You are about to enter an Abbott country or region specific website.

Please be aware that the website you have requested is intended for the residents of a particular country or countries, as noted on that site. As a result, the site may contain information on pharmaceuticals, medical devices and other products or uses of those products that are not approved in other countries or regions.

Do you wish to continue and enter this website?

Yes No

You are about to enter an Abbott country or region specific website.

Please be aware that the website you have requested is intended for the residents of a particular country or countries, as noted on that site. As a result, the site may contain information on pharmaceuticals, medical devices and other products or uses of those products that are not approved in other countries or regions.

Do you wish to continue and enter this website?

Yes No