计数指南

计数指南

结果解读

 

CEP 和 LSI 用于间期核的计数指南如下所示。我们鼓励用户应用这些指南,并在必要时提供附加指南,以提高实验室内计数的精密度、准确性和可重现性。下面介绍一种用于 CEP® 和 LSI® 计数的玻片扫描技术。无论是本技术还是其他技术,只要在实验室中经过标准化,就可能提高计数的准确性和可重现性。

  1. 使用低放大倍率物镜扫描目标区域以检查细胞分布。
  2. 在目标上选择一个细胞分布均匀区域,而其密度应为在一个 400X 视野下可见数个可评估的细胞核。避免细胞分布密集、核互相重叠或各个核的核边界不清晰的区域。
  3. 使用 40X 至 100X Plan Apo 油浸物镜,并首先聚焦于所选视野的左上象限。聚焦于第一视野中的每个有效细胞核,并计算核边界内一种探针颜色的信号数量。信号可能是明亮而紧凑的椭圆形状、分裂成两个较小但相连接的点或者一个纤细的漫反射形状。通过在更高放大倍率下观察来评估分裂或可疑的信号。记录每个细胞的信号计数。从左到右(或从上到下)移动以继续在玻片中寻找具有可评估核的视野。当到达可见或可解读细胞核的边界时,跳到下一个视野并继续扫描过程。重复此扫描过程,直到计数到合适数量的核(200 至 500 或更多,取决于异常细胞的出现频率)。对每种不同的探针重复此过程,直到已收集完所有计数探针的数据。
 
 
 
 
单色计数

推荐的用于单色探针计数的计数指南

为了使复染荧光(如有)成像,单色探针计数可以使用单带通滤光片或多带通滤光片组来进行。

  1. 请勿评估互相接触或重叠的细胞。
  2. 如果漫射信号与其他信号分离,则将其计算在内。
  3. 将分裂信号(两个非常接近的小信号)计为一个信号。这两个信号代表单个染色体组分。
  4. 将通过一束荧光连接的两个信号计为一个信号。
  5. 请勿对零信号的细胞进行计数,除非它们被包含信号的核所包围。
  6. 请勿评估不完整的核。
  7. 请勿评估具有不同颜色重叠信号的核。
  8. 请勿对非特异性杂交信号计数。这些信号可以通过其较低强度和不同形状被识别。
  9. 请勿用位于核外围的信号来评估细胞核。
  10. 仅计算可以进行明确计数的核;跳过所有其他的核。
  11. 准确记录。重新计数,以便验证有问题的计数。
fish-lab-quality-control-guidelines-for-single-color-enumeration.gif

 

 
 
 
 
双色计数

使用单带通滤光片组或同时使用多带通滤光片组时,可能将杂交至相同细胞的带有不同颜色荧光团标记的两个或更多探针计数为一个,具体取决于探针的信号强度和核的大小。由于核中探针信号的分布稀疏或由于所感知的探针信号很微弱,使用多带通滤光片组可能不容易计数具有较小或狭窄细胞核的细胞。

  1. 请勿评估互相接触或重叠的细胞。
  2. 如果漫射信号与其他信号分离,则将其计算在内。
  3. 将分裂信号(两个非常接近的小信号)计为一个信号。这两个信号代表单个染色体组分。
  4. 将通过一束荧光连接的两个信号计为一个信号。
  5. 请勿对零信号的细胞进行计数,除非它们被包含信号的核所包围。
  6. 请勿评估不完整的核。
  7. 请勿评估具有不同颜色重叠信号的核。
  8. 请勿对非特异性杂交信号计数。这些信号可以通过其较低强度和不同形状被识别。
  9. 请勿用位于核外围的信号来评估细胞核。
  10. 仅计算可以进行明确计数的核;跳过所有其他的核。
  11. 准确记录。重新计数,以便验证有问题的计数。
 
 
 
 

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