Risoluzione dei problemi per le sezioni in paraffina

  1. Verificare che la temperatura del bagnomaria circolante a 80C rimanga costante. La fluttuazione di tale temperatura può dare risultati scadenti. Sfere in polipropilene per la superficie di isolamento sono disponibili per l'acquisto al catalogo VWR n. 26396-466.

    Per riprocessare lo stesso vetrino:
  2. Rimuovere il vetrino coprioggetti e sottoporre i vetrini ad una serie di lavaggi con etanolo (al 70, all'85, al 100%), ciascun passaggio per 1 minuto. Lasciare asciugare i vetrini e immergerli nuovamente in soluzione di proteasi per altri 10-45 minuti a seconda del livello di digestione. Non fissare di nuovo i vetrini in formalina. Denaturare di nuovo a 73C per 6 minuti e ibridare per tutta la notte a 37C. In condizioni estreme, potrebbe essere necessario pretrattare di nuovo partendo dal tiocianato di sodio a 80C e arrestarsi dopo soluzione di proteasi; denaturare e ibridare nuovamente.
  3. Se le sezioni non sono fissate in formalina per 24-48 ore, la corretta digestione sarà molto difficile.
  4. Verificare che il pH del tampone proteasi sia 2. In caso contrario, regolare il pH e l'enzima diventerà di nuovo attivo.
  5. Assicurarsi che il tampone proteasi sia riscaldato a 37C prima di aggiungere la proteasi.
  6. Lavare le sezioni in paraffina in 2XSSC/0,3%NP-40 per 2 min a 72ºC. Un lavaggio ambiente dopo ciò non è raccomandato.
  7. Se il pretrattamento ancora non funziona, potrebbe essere necessario passare a un pretrattamento più estremo. Si prega di contattare l'ufficio locale di assistenza tecnica.

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