Procedura FISH sequenziale

Se i risultati ottenuti dalla FISH sono inadeguati, a prescindere dalla causa, nella maggior parte dei casi i vetrini possono essere reibridati con una nuova miscela. Nel caso in cui la sonda sia marcata direttamente, la si può usare comunque oppure utilizzare una sonda diversa.  

Le condizioni si basano su campioni di sangue periferico.

  1. Utilizzando un forcipe, rimuovere con cautela il vetrino coprioggetti dai bersagli precedentemente ibridati.
  2. Disidratare i vetrini a temperatura ambiente immergendoli in una serie di soluzioni di lavaggio con etanolo al 70%, 85% e 100% per 1 minuto in ciascuna. Far asciugare il vetrino all'aria. I vetrini sono adesso pronti per una nuova ibridazione. Si consiglia di ridurre il tempo di denaturazione del vetrino del 50% circa rispetto al tempo originario, ma senza scendere al di sotto di 3 minuti. Non è necessario ridurre ulteriormente il tempo di denaturazione nella reibridazione successiva.

L'intensità del colorante di contrasto si riduce a ogni successiva ibridazione, tuttavia la perdita è minima. È possibile eseguire fino a 8 ibridazioni ripetute della stessa metafase con diverse sonde.

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