Linee guida per l'enumerazione

Linee guida per l'enumerazione

Interpretazione dei risultati

 

Le linee guida per l'enumerazione per CEP e LSI su nuclei di interfase sono indicate di seguito. L'utente è invitato ad applicare queste linee guida e a fornire indicazioni aggiuntive secondo necessità per migliorare la precisione, la precisione e la riproducibilità dell'enumerazione nel laboratorio. Una tecnica di scansione vetrini per enumerazione CEP® e LSI® è descritta di seguito. Questa tecnica o un'altra, a condizione che essa sia standardizzato in laboratorio, può aumentare l'accuratezza e la riproducibilità dell'enumerazione.

  1. Eseguire la scansione sull'area bersaglio usando un obiettivo a bassa potenza per esaminare la distribuzione cellulare.
  2. Selezionare un'area sul bersaglio in cui le cellule siano uniformemente distribuite ancora ad una densità che diversi nuclei possano essere valutati in campo 400X. Evitare le aree in cui la distribuzione cellulare sia densa, i nuclei siano sovrapposti o i bordi nucleari dei singoli nuclei non siano definiti.
  3. Utilizzare un obiettivo ad immersione ad olio Plan Apo 40x - 100X e concentrarsi in primo luogo sul quadrante superiore sinistro del campo selezionato di osservazione. Focalizzare su ciascun nucleo valido nel primo campo di osservazione e contare il numero di segnali di un colore di sonda entro il limite del nucleo. I segnali possono essere brillanti e di forma ovale compatta, divisi in due punti più piccoli ma collegati, o a forma diffusa filamentosa. Valutare i segnali spezzati o discutibili osservando a maggiore ingrandimento. Registrare il conteggio dei segnali da ciascuna cellula. Muovendo da sinistra a destra (o dall'alto in basso) continuare a eseguire la scansione del vetrino alla ricerca di campi con nuclei valutabili. Una volta raggiunto il bordo di nuclei visibili o interpretabili, passare al campo successivo e continuare il processo di scansione. Ripetere questo processo di scansione fino a che non sia stato numerato un numero adeguato di nuclei (200 - 500 o più, a seconda della prevalenza delle cellule anomale). Ripetere questo processo per ciascuna sonda differente fino a quando i dati non vengono raccolti per tutte le sonde di enumerazione.
 
 
 
 
Enumerazione a singola colorazione

Linee guida per enumerazione raccomandate per enumerazione sonde a singola colorazione

L'enumerazione delle sonde a singola colorazione può essere eseguita utilizzando un filtro a banda passante unica o un set di filtri a banda passante multipla in modo da visualizzare la fluorescenza del colorante di contrasto (se presente).

  1. Non valutare le cellule che si toccano o sovrappongono.
  2. Contare segnali diffusi se sono separati da altri segnali.
  3. Contare i segnali spezzati - due segnali più piccoli a distanza molto ravvicinata - come un segnale unico. I due segnali rappresentano un unico complemento cromosomico.
  4. Contare due segnali collegati da un filamento di fluorescenza come un segnale.
  5. Non contare le cellule con segnali zero a meno che esse non siano circondate da nuclei che contengono segnali.
  6. Non valutare i nuclei che non sono intatti.
  7. Non valutare i nuclei con sovrapposizione di segnali di colore diverso.
  8. Non contare segnali di ibridazione aspecifica. Questi segnali possono essere riconosciuti dalla loro intensità minore e dalla forma diversa.
  9. Non valutare i nuclei con segnali situati alla periferia del nucleo.
  10. Contare solo i nuclei in cui possa essere effettuata una enumerazione definita; saltare tutti gli altri.
  11. Registrare in modo accurato. Ricontare per convalidare i conteggi dubbi.
fish-lab-quality-control-guidelines-for-single-color-enumeration.gif

 

 
 
 
 
Enumerazione a doppia colorazione

Due o più sonde marcate con fluorofori a colori differenti che sono ibridate alle stesse cellule possono essere enumerate singolarmente set di filtri a banda passante singola o utilizzando simultaneamente set di filtri a banda passante multipla, a seconda dell'intensità del segnale delle sonde e delle dimensioni del nucleo. Può non essere facile riuscire a enumerare cellule con nuclei piccoli o ristretti set di filtri multibanda, a causa della disposizione spaziale del segnale delle sonde nel nucleo o a causa di segnali di sonda percepiti come tenui.

  1. Non valutare le cellule che si toccano o sovrappongono.
  2. Contare segnali diffusi se sono separati da altri segnali.
  3. Contare i segnali spezzati - due segnali più piccoli a distanza molto ravvicinata - come un segnale unico. I due segnali rappresentano un unico complemento cromosomico.
  4. Contare due segnali collegati da un filamento di fluorescenza come un segnale.
  5. Non contare le cellule con segnali zero a meno che esse non siano circondate da nuclei che contengono segnali.
  6. Non valutare i nuclei che non sono intatti.
  7. Non valutare i nuclei con sovrapposizione di segnali di colore diverso.
  8. Non contare segnali di ibridazione aspecifica. Questi segnali possono essere riconosciuti in base alla loro minore intensità e forma diversa.
  9. Non valutare i nuclei con segnali situati alla periferia del nucleo.
  10. Contare solo i nuclei in cui possa essere effettuata una enumerazione definita; saltare tutti gli altri.
  11. Registrare in modo accurato. Ricontare per convalidare i conteggi dubbi.
 
 
 
 

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