Traitement de l'échantillon d'urine

  1. Centrifugez l'urine dans un tube à centrifugation de 50 ml à 600 g pendant 10 minutes à température ambiante (15-30 °C).
  2. Retirez le surnageant d'environ 1 à 2 ml de culot de cellules, en faisant attention à ne pas perturber le culot.
  3. Remettez le culot en suspension dans les 1 à 2 ml de surnageant restant et transférez les contenus dans un tube à centrifuger conique de 15 ml. Rincez le tube de 50 ml avec 10 ml de 1X PBS et transférez le contenu dans le tube de 15 ml.
  4. Centrifugez le ou les échantillons à 600 g pendant 10 minutes à température ambiante.
  5. Retirez le surnageant d'environ 0,5 ml de culot de cellules.
  6. Remettez le culot en suspension dans les 0,5 ml de surnageant restant. Ajoutez lentement de 1 à 5 ml de fixateur frais (3:1, méthanol:acide acétique), goutte à goutte au début, en agitant fréquemment.
  7. Laissez les échantillons fixés à -20 ºC pendant 30 minutes minimum.
  8. Centrifugez le ou les échantillons à 600 g pendant 5 minutes à température ambiante. Retirez le surnageant avec précaution.
  9. Lavez le culot en le remettant en suspension dans 1 à 5 ml de fixateur.
  10. Centrifugez le ou les échantillons à 600 g pendant 5 minutes à température ambiante. Répétez les étapes 8 et 9 deux fois.
  11. Après centrifugation de la suspension cellulaire dans un liquide fixateur :
    • Si le culot de cellules est très petit et à peine visible, retirez AVEC PRÉCAUTION le plus possible de liquide fixateur, en laissant environ 100 µl de solution. 
    • Si le culot de cellules est facilement visible, retirez autant de liquide fixateur que possible et ajoutez de 0,5 à 1 ml de fixateur au culot de cellules.
  12. Appliquez immédiatement le protocole de prétraitement de la lame. Enfin, procédez au prétraitement FISH. 

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