Guide de dépannage pour les coupes en paraffine

  1. Vérifiez que la température du bain-marie en circulation reste à 80 °C. Toute fluctuation de cette température peut entrainer de mauvais résultats. Des billes en polypropylène pour l'isolation en surface sont disponibles à la vente dans le catalogue VWR (réf. 26396-466).

    Pour retraiter la même lame :
  2. Retirez la lamelle et plongez les lames dans une série de solutions d'éthanol (70, 85 et 100 %), pendant 1 minute à chaque fois. Laissez les lames sécher et replacez les lames dans une solution de protéase pendant 10 à 45 minutes supplémentaires en fonction du niveau de digestion. N'analysez plus les lames à travers le fixateur au formol. Re-dénaturez à 73 °C pendant 6 minutes et hybridez toute la nuit à 37 °C. Dans des conditions extrêmes, ré-traitez en commençant par du thiocyanate de sodium à 80 °C, arrêtez après la dénaturation de la solution de protéase puis hybridez de nouveau.
  3. Si les coupes ne sont pas fixées au formol pendant 24 à 48 heures, une digestion correcte sera très difficile.
  4. Vérifiez que le pH du tampon de protéase est de 2. Sinon, ajustez le pH et l'enzyme redeviendra active.
  5. Assurez-vous que le tampon de protéase est chauffé à 37 °C avant d'ajouter la protéase.
  6. Lavez les coupes en paraffine dans une solution 2X SSC/0,3 % de NP-40 pendant 2 min à 72 °C. Un lavage à température ambiante après cette manipulation n'est pas recommandé.
  7. Si le prétraitement ne fonctionne toujours pas, passez à un prétraitement plus intense. Contactez le Service technique le plus proche.

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