Lames colorées avant le protocole FISH : Préparation des solutions

Préparation des solutions
  • Préparez une solution mère de pepsine. Conservez-la au congélateur. Dissolvez 0,5 g de pepsine dans 5 ml d'eau distillée. La concentration de pepsine est de 100 mg/ml.
  • Préparez une solution de travail de pepsine (0,05 mg/ml). Ajoutez 20 µl de solution mère de pepsine dans 40 ml de HCl 10 mM. La concentration finale de pepsine est de 0,05 mg/ml.
  • Solution de fixation au formaldéhyde 1 % (V =400 ml). Mélangez 10 ml de formaldéhyde à 37 % avec 386 ml de PBSx1 et 4 ml de 100XMgCl2 100XMgCl2 = 2 M MgCl2. Conservez la solution au réfrigérateur. Jetez-la après chaque utilisation. Jetez la solution après chaque utilisation.
 
 
 
 
Retrait des lamelles
  1. Plongez les lames dans du xylène pendant environ 48 h à température ambiante ou jusqu'à ce que les lamelles soient faciles à retirer ou qu'elles glissent des lames.
  2. Lavez les lames dans du xylène frais pendant 5 min. Il est conseillé de laver les lames une troisième fois en les plongeant dans une nouvelle solution de xylène pendant 5 min.
  3. Laissez sécher les lames à l'air pendant environ 15 min.
  4. Placez les lames dans un tube de Coplin contenant de l'éthanol à 95 %. Le stockage au réfrigérateur est possible pendant plusieurs jours/semaines.
  5. Lavez les lames dans un tube de Coplin contenant de l'éthanol à 85 % pendant 5 minutes, puis lavez-les dans un tube de Coplin contenant de l'éthanol à 70 % pendant 5 min.
  6. Incubez les lames dans une solution 2X SSC pendant 15 à 60 min
  7. Procédez à un pré-traitement suivi d'un protocole FISH.
 
 
 
 
Procédure de prétraitement
  1. Incubez les lames dans la solution 2X SSC pendant 10 min à 37 °C.
  2. Incubez les lames dans la solution de travail de pepsine pendant 13 min à 37 °C.
  3. Incubez dans la solution PBS X1 pendant 5 min à température ambiante.
  4. Fixez les lames dans la solution de formaldéhyde 1 % pendant 5 min à température ambiante.
  5. Nettoyez les lames dans la solution PBS X1 pendant 5 min à température ambiante.
  6. Procédez à la dénaturation des lames en suivant le protocole FISH.
 
 
 
 

You are about to exit the Abbott family of websites for a 3rd party website

Links which take you out of Abbott worldwide websites are not under the control of Abbott, and Abbott is not responsible for the contents of any such site or any further links from such site. Abbott is providing these links to you only as a convenience, and the inclusion of any link does not imply endorsement of the linked site by Abbott. The website that you have requested also may not be optimised for your screen size.

Do you wish to continue and exit this website?

Yes No

You are about to enter an Abbott country or region specific website.

Please be aware that the website you have requested is intended for the residents of a particular country or countries, as noted on that site. As a result, the site may contain information on pharmaceuticals, medical devices and other products or uses of those products that are not approved in other countries or regions.

Do you wish to continue and enter this website?

Yes No

You are about to enter an Abbott country or region specific website.

Please be aware that the website you have requested is intended for the residents of a particular country or countries, as noted on that site. As a result, the site may contain information on pharmaceuticals, medical devices and other products or uses of those products that are not approved in other countries or regions.

Do you wish to continue and enter this website?

Yes No