MultiVysion^® PGT : Réactifs nécessaires

Le protocole de version courte ne doit pas remplacer la notice d'emballage.

Les sondes sont pré-mélangées dans un tampon d'hybridation.  3 µl sont utilisés par zone cible. 

Remarque : si la durée d'hybridation maximale recommandée est de 8 heures, la durée optimale est toutefois de 4 heures. Une durée d'hybridation supérieure peut donner lieu à une coloration nucléaire importante susceptible d'effacer les signaux de sonde.

Réactifs à usage général requis mais non fournis.

Consultez le chapitre Préparation des échantillons pour connaître le protocole de préparation des blastomères humains pour la technique FISH.

La visualisation et l'analyse appropriées de l'hybridation MultiVysion® dépendent fortement de l'utilisation d'ensembles de filtres appropriés et d'un microscope à fluorescence bien aligné. Il se peut que certains ensembles de filtres nécessaires à la visualisation ou à l'imagerie des résultats MultiVysion PB ne soient pas disponibles dans votre laboratoire. Contactez le service technique Vysis pour plus d'informations sur les spécifications des ensembles de filtres. Tous les ensembles de filtres sont disponibles chez Vysis, Inc. 

Les ensembles de filtres minimaux suivants sont recommandés pour la visualisation des résultats MultiVysion PGT :

1) Ensemble de filtres passe-bande doubles Bleu/Aqua

2) Ensemble de filtres passe-bande doubles Vert/Rouge

3) Ensemble de filtres passe-bande uniques Or (Jaune)

4) Ensemble de filtres passe-bande uniques Aqua v2 (en option pour la clarification des signaux observés sur l'ensemble de filtres passe-bande doubles Bleu/Aqua en présence de difficultés à distinguer les signaux de sonde Bleu des signaux de sonde Aqua)

Visualisez les résultats de l'hybridation de la manière suivante :

1. Trouvez la cellule cible en contraste de phase, avec un grossissement faible (100X) à l'aide des coordonnées enregistrées précédemment.
2. Une fois que la cellule est localisée, sans déplacer la platine du microscope, passez à la lumière fluorescente à l'aide de l'ensemble de filtres passe-bande uniques Aqua et localisez à nouveau la cellule avec un grossissement faible (100X). Une fois que la cellule est localisée à l'aide de la fluorescence, passez à un grossissement de haute puissance (1000X) pour procéder à l'analyse. Suivez la séquence de visualisation A ou B selon les ensembles de filtres qui seront utilisés pour l'analyse. 

A. Si l'ensemble de filtres utilisé pour l'analyse des sondes marquées à l'aide des marqueurs SpectrumAquaTM et SpectrumBlueTM est l'ensemble de filtres passe-bande doubles Bleu/Aqua, procédez à la localisation et à l'analyse suivantes : 

• Localisez la cellule à l'aide de l'ensemble de filtres passe-bande doubles Aqua/Bleu.
• Analysez chacune des autres sondes à l'aide des filtres suivants, dans cet ordre :

1) Passe-bande double Aqua/Bleu

2) Passe-bande double Vert/Rouge

3) Passe-bande unique Or (Jaune)

Remarque : il est recommandé de visualiser l'échantillon et de procéder à l'imagerie dans cet ordre pour minimiser l'ampleur de la décoloration. Dans cet ordre, les fluorophores les plus sensibles sont exposés en premier à la lumière.

B. Si les ensembles de filtres utilisés pour l'analyse sont des ensembles de filtres passe-bande uniques, procédez à la localisation et à l'analyse suivantes :

• Localisez la cellule à l'aide de l'ensemble de filtres passe-bande uniques Aqua/Bleu.
• Analysez chacune des autres sondes à l'aide des filtres suivants, dans cet ordre :

1) Passe-bande unique Bleu

2) Passe-bande unique Rouge

3) Passe-bande unique Or (Jaune)

4) Passe-bande unique Vert 

5) Passe-bande unique Aqua