Procesamiento de muestras de orina

  1. Centrifugue la orina en un tubo de centrífuga de 50 ml a 600 g durante 10 minutos a temperatura ambiente (15-30 °C).
  2. Retire el sobrenadante hasta una distancia aproximada de 1 a 2 ml del pellet de células, con cuidado de no alterar el pellet.
  3. Resuspenda el pellet en los 1-2 ml de sobrenadante que queda y transfiera el contenido a un tubo de centrífuga cónico de 15 ml. Lave el tubo de 50 ml con 10 ml de 1X PBS y transfiera el contenido al tubo de 15 ml.
  4. Centrifugue la muestra a 600 g durante 10 minutos a temperatura ambiente.
  5. Retire el sobrenadante hasta aproximadamente 0,5 ml del pellet de células.
  6. Resuspenda el pellet en los 0,5 ml de sobrenadante que quedan. Añada lentamente 1-5 ml de fijador nuevo (metanol:ácido acético, 3:1), gota a gota al principio, con agitación frecuente.
  7. Deje reposar las muestras fijadas a -20 °C durante 30 minutos como mínimo.
  8. Centrifugue la muestra a 600 g durante 5 minutos a temperatura ambiente. Retire el sobrenadante con cuidado.
  9. Lave el pellet resuspendiéndolo en 1-5 ml de fijador.
  10. Centrifugue la muestra a 600 g durante 5 minutos a temperatura ambiente. Repita los pasos 8 y 9 dos veces.
  11. Después de centrifugar la suspensión celular en fijador:
    • Si el pellet de células es muy pequeño y apenas visible, retire CON CUIDADO tanta cantidad de fijador como sea posible, dejando aproximadamente 100 µl de solución. 
    • Si el pellet de células es fácilmente visible, retire tanta cantidad de fijador como sea posible y agregue 0,5-1 ml de fijador nuevo al pellet.
  12. Continúe de inmediato con el protocolo de pretratamiento de portaobjetos. Siga con el kit de pretratamiento de FISH. 

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