Solución de problemas con cortes de parafina

  1. Verifique que la temperatura del baño de agua circulante de 80 °C permanezca constante. Si esta temperatura fluctúa, podrían obtenerse resultados erróneos. Existen bolas de polipropileno para el aislamiento de la superficie en el catálogo de VWR, con la referencia 26396-466.

    Para reprocesar el mismo portaobjetos:
  2. Retirar el cubreobjetos y pase los portaobjetos por la serie de etanol (al 70, 85 y 100 %) durante 1 minuto cada uno. Deje secar los portaobjetos y colóquelos de nuevo en una solución de proteasa durante 10-45 minutos más, dependiendo del nivel de digestión. No vuelva a pasar los portaobjetos por el fijador de formol. Vuelva a desnaturalizar a 73 °C durante 6 minutos y deje hibridar durante la noche a 37 °C. En condiciones extremas, es posible que tenga que repetir el pretratamiento empezando con el tiocianato de sodio a 80 °C y detenerse después de la desnaturalización de la solución de proteasa e hibridar de nuevo.
  3. Si los cortes no se fijan con formol durante 24-48 horas, será muy difícil conseguir una digestión adecuada.
  4. Compruebe que el pH del tampón de proteasa sea 2. Si no es así, ajuste el pH y la enzima volverá a activarse.
  5. Asegúrese de que el tampón de proteasa se caliente a 37 °C antes de añadir la proteasa.
  6. Lave los cortes de parafina en 2XSSC/0,3 %NP-40 durante 2 minutos a 72 °C. No se recomienda realizar un lavado a temperatura ambiente después de esto.
  7. Si el pretratamiento sigue sin funcionar, puede que tenga que realizar un pretratamiento más agresivo. Póngase en contacto con la oficina local del servicio técnico.

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