MultiVysion^® PB: Reactivos necesarios

La versión corta del protocolo no debe sustituir al prospecto.

Las sondas se mezclan previamente en tampón de hibridación.  Se utilizan 3 µl por área diana. 

Nota: El tiempo máximo de hibridación recomendado es de 8 horas, pero con 4 horas se obtienen resultados óptimos. Una hibridación de mayor duración puede dar lugar a una elevada tinción nuclear que podría ocultar las señales de la sonda.

Reactivos de uso general necesarios pero no proporcionados. 

Consulte un protocolo de preparación de blastómeros humanos para FISH en la sección sobre preparación de muestras.

La adecuada visualización y análisis de la hibridación MultiVysion^® depende en gran medida del uso de los juegos de filtros correctos y de un microscopio de fluorescencia bien alineado. Algunos de los juegos de filtros necesarios para la visualización o la adquisición de imágenes de los resultados de MultiVysion PB pueden no estar disponibles en su laboratorio. Póngase en contacto con el departamento de servicio técnico de Vysis para obtener más información sobre especificaciones de juegos de filtros. Todos los juegos de filtros están disponibles a través de Vysis, Inc. 

Como mínimo, se recomiendan los siguientes juegos de filtros para la visualización de los resultados de MultiVysion PB:

1) Juego de filtros paso-banda doble azul/aguamarina

2) Juego de filtros paso-banda doble verde/rojo

3) Juego de filtros paso-banda único dorado (amarillo)

4) Juego de filtros paso-banda único aguamarina v2 (opcional para la aclaración de las señales observadas en el juego de paso-banda doble azul/aguamarina si se tienen dificultades para distinguir las señales de sonda azul y aguamarina)

Visualice los resultados de la hibridación de la siguiente manera:

1. Encuentre la célula diana con el contraste de fases, con bajo aumento (100X) utilizando las coordenadas previamente anotadas.
2. Una vez localizada la célula, sin mover la platina del microscopio, cambia a luz fluorescente utilizando el juego de filtros paso-banda único aguamarina y vuelva a localizar la célula con bajo aumento (100X). Una vez que la célula se ha localizado de nuevo con fluorescencia, cambie a un aumento de la magnificación de alta resolución (1000X) para proceder al análisis. Siga con la visualización de la secuencia A o B, según los juegos de filtros que se vayan a utilizar para el análisis. 

A. Si se utiliza el juego de filtros paso-banda doble azul/aguamarina para el análisis de las sondas marcadas con SpectrumBlueTM y SpectrumAquaTM, localice y analice del siguiente modo: 

• Localice la célula utilizando un juego de filtros paso-banda doble azul/aguamarina.

• Analice cada una de las demás sondas utilizando la siguiente secuencia de filtros:

1) paso-banda doble azul/aguamarina

2) paso-banda doble verde/rojo

3) paso-banda único dorado (amarillo)

Nota: Se recomienda que la visualización o la obtención de imágenes de la muestra se realicen en esta secuencia para minimizar el grado de decoloración por exposición a la luz. Si se sigue esta secuencia, los fluoróforos más sensibles se exponen a la luz en primer lugar.

B. Si se utilizan juegos de filtros paso-banda único para el análisis, localice y analice del siguiente modo:

• Localice la célula utilizando el juego de filtros paso-banda único azul/aguamarina.

• Analice cada una de las demás sondas utilizando la siguiente secuencia de filtros:

1) paso-banda único azul

2) paso-banda único rojo

3) paso-banda único dorado (amarillo)

4) paso-banda único verde 

5) paso-banda único aguamarina