Reactivos para equipos de laboratorio

Reactivos para equipos de laboratorio

Materiales necesarios

 

Los siguientes materiales auxiliares, reactivos y equipos son necesarios para realizar ensayos de FISH.

  • Etanol (EtOH) al 100 %
  • Agua purificada (destilada o desionizada)
  • HCI 12 N (para ajustar el pH de las soluciones de lavado)
  • NaOH 1N (para ajustar el pH de las soluciones de lavado)
  • 20X SSC (500 g) (n.º de pedido Vysis 32-804850)
  • NP-40 (n.º de pedido Vysis 32-804818)
  • Cubetas de vidrio tipo Coplin
  • Termómetro calibrado
  • Tinción de contraste DAPI I (n.º de pedido Vysis 30-804830)
  • Tinción de contraste DAPI II (n.º de pedido Vysis 30-804831)
  • Pinzas
  • Formamida, grado ultrapuro (n.º de pedido Vysis US75828)
  • Probeta graduada de 1000 ml
  • Agitador magnético
  • Metanol (para preparación de portaobjetos)
  • Microcentrífuga
  • Puntas para micropipetas para volúmenes de 1 a 10 µl
  • Micropipeteador para volúmenes de 1 a 10 µl
  • Medidor de pH
  • Portaobjetos de vidrio prelavados para microscopio
  • Agua purificada
  • Cronómetro
  • Agitador vórtex
  • Baño de agua (37 y 72 °C)

Reactivos de pretratamiento

  • Kit de pretratamiento de parafina I (32-801200)
  • Kit de pretratamiento de parafina II (32-801210)
  • Kit de pretratamiento de parafina III (32-801230)

  

 
 
 
 
Preparación de reactivos

Nota: En los casos indicados, mida el pH de estas soluciones a temperatura ambiente. Utilice un medidor de pH con electrodo de vidrio, a menos que se indique lo contrario.

 

Solución 20X SSC

 

Mezcle a fondo 132 g de 20X SSC con 400 ml de H2O purificada. Mida el pH y ajústelo a pH 5,3 con HCl. Añada H2O purificada hasta un volumen final de 500 ml. Conserve la mezcla a temperatura ambiente. Deseche la solución madre después de 6 meses o antes si parece turbia o contaminada.

 

 Solución 2X SSC

 

Mezcle bien 100 ml de 20X SSC (pH 5,3) con 850 ml de H2O purificada. Mida el pH y ajústelo a pH 7,0 ± 0,2 con NaOH. Añada H2O purificada hasta un volumen final de 1 litro. Conserve la mezcla a temperatura ambiente. Deseche la solución madre después de 6 meses o antes si parece turbia o contaminada.

 

Solución de desnaturalización (formamida al 70 %/2X SSC)

 

Mezcle bien 49 ml de formamida ultrapura, 7 ml de 20X SSC (pH 5,3) y 14 ml de H2O purificada a una cubeta de vidrio tipo Coplin. Mida el pH con tiras indicadoras de pH para comprobar que el pH es de 7,0-8,0. Entre usos, guárdela cubierta a 2-8 °C. Deséchela al cabo de 7 días.

 

Solución de lavado 0,4X SSC/0,3 % NP-40

 

Mezcle a fondo 20 ml de 20X SSC (pH 5,3) con 950 ml de H2O purificada. Añada 3 ml de NP-40. Mezcle a fondo hasta que el NP-40 se disuelva del todo. Mida el pH y ajústelo a pH 7,0-7,5 con NaOH. Añada H2O purificada hasta un volumen final de la solución de 1 litro. Conserve la mezcla a temperatura ambiente. Deseche la solución madre después de 6 meses o antes si parece turbia o contaminada.

 

Solución de lavado 2X SSC/0,1 % NP-40

 

Mezcle bien 100 ml de 20X SSC (pH 5,3) con 850 ml de H2O purificada. Añada 1 ml de NP-40. Mida el pH y ajústelo a pH 7,0 ± 0,2 con NaOH. Añada H2O purificada hasta un volumen final de 1 litro. Conserve la mezcla a temperatura ambiente. Deseche la solución madre después de 6 meses o antes si parece turbia o contaminada.

 

Soluciones de etanol (70 %, 85 %, 100 %)

 

Prepare diluciones v/v de 100 % etanol con H2O purificada. Entre usos, conserve las soluciones bien tapadas a temperatura ambiente. Deseche las soluciones madre después de 6 meses.

 

PBS

 

Prepare PBS diluyendo 20 ml de PBS 10X con 180 ml de H2O purificada. Conserve la mezcla a temperatura ambiente. Deseche la solución madre después de 6 meses o antes si parece turbia o contaminada.

 

Solución madre de ARNasa A y solución de trabajo

 

Prepare una solución madre de 10 mg/ml de ARNasa A (sin ADNasa) en 2X SSC. Si en la ficha técnica de la ARNasa no se indica que no contiene ADNasa, ponga la solución de ARNasa en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos para inactivar la ADNasa. Haga alícuotas de 10 µl y consérvelas a -20 °C en tubos con tapa de 1,0 ml. Cuando se vaya a usar, prepare la solución de trabajo de ARNasa descongelando la solución madre de ARNasa (10 mg/ml) en el tubo y añadiendo directamente 990 µl de 2X SSC con pH 7,0-7,4 a los 10 µl que contiene el tubo. Agite en el vórtex para mezclar. No congele y descongele. Deseche después de usar.

 

Solución madre y solución de trabajo de pepsina

 

Prepare una solución madre de pepsina al 10 % mezclando 0,1 gramos de pepsina en 1 ml de agua (precalentada a 37 °C). Haga alícuotas de 35 µl y consérvelas a -20 °C hasta que estén listas para usar. Cuando estén listas para usar, prepare una solución de trabajo de pepsina al 0,005 % mezclando 35 µl de la solución madre de pepsina al 10 % en una solución de 69,3 ml de agua purificada y 0,7 ml de HCl 1,0 N que se haya calentado a 37 °C en una cubeta tipo Coplin (utilizando un baño de agua a 37 °C).

 

Solución de fijación en formaldehído

 

Mezcle 57,6 ml de agua purificada, 3,5 ml de MgCl2 1 M, 7 ml de 10X PBS y 1,89 ml de formaldehído al 37 %. Mezcle bien. Ponga la mezcla en una cubeta tipo Coplin. Preparar una solución nueva cada día.

 
 
 
 

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