Directrices de enumeración

Directrices de enumeración

Interpretación de resultados

 

A continuación se proporcionan las directrices de enumeración para CEP y LSI en núcleos en interfase. Se recomienda encarecidamente al usuario aplicar estas directrices y proporcionar directrices adicionales según sea necesario para mejorar la precisión, la exactitud y la reproducibilidad de la enumeración en el laboratorio. A continuación se describe una técnica para la exploración de portaobjetos para la enumeración de CEP® y LSI®. Esta técnica o cualquier otra, siempre que esté estandarizada en el laboratorio, podrían aumentar la exactitud y reproducibilidad de la enumeración.

  1. Explore el área diana con un objetivo de baja resolución para examinar la distribución de las células.
  2. Seleccione un área de la diana en la que las células se distribuyan de forma uniforme, pero con una densidad en la que se puedan evaluar varios núcleos en un campo de 400X. Evite áreas en las que la distribución de células sea densa, los núcleos estén superpuestos o los contornos nucleares de los distintos núcleos no estén definidos.
  3. Utilice un objetivo de inmersión Plan Apo de 40X a 100X y céntrese primero en el cuadrante superior izquierdo del campo de visión seleccionado. Céntrese en cada núcleo válido del primer campo de visión y cuente el número de señales de un color de sonda dentro del límite nuclear. Las señales pueden ser formas ovaladas compactas o brillantes, estar divididas en dos puntos más pequeños pero conectados o tener una forma difusa y filamentosa. Evalúe las señales dudosas o divididas mediante la observación con un aumento mayor. Anote el recuento de señales de cada célula. Desplazándose de izquierda a derecha (o de arriba a abajo), siga analizando el portaobjetos en busca de campos con núcleos evaluables. Cuando alcance el límite de los núcleos interpretables o visibles, pase al campo siguiente y continúe el proceso de exploración. Repita este proceso de exploración hasta contar el número apropiado de núcleos (de 200 a 500 o más, en función de la prevalencia de células anómalas). Repita este proceso para cada sonda diferente hasta que se recopilen datos para todas las sondas de enumeración.
 
 
 
 
Enumeración de un único color

Directrices recomendadas para la enumeración de sondas de un único color

La enumeración de sonda de un único color se puede realizar con un juego de filtros paso-banda único o un juego de filtros de varios paso-banda a fin de visualizar la fluorescencia de la tinción de contraste (si la hay).

  1. No evalúe las células que se toquen o estén superpuestas.
  2. Haga un recuento de las señales difusas si están separadas de otras señales.
  3. Contabilice las señales divididas (dos señales más pequeñas muy próximas) como una sola señal. Las dos señales representan un único complemento cromosómico.
  4. Contabilice dos señales conectadas por una hebra de fluorescencia como una única señal.
  5. No contabilice células sin ninguna señal a menos que estén rodeadas por núcleos que contengan señales.
  6. No evalúe los núcleos que no estén intactos.
  7. No evalúe los núcleos con señales superpuestas de diferente color.
  8. No contabilice las señales de hibridación inespecíficas. Estas señales se pueden recocer por su baja intensidad y por tener una forma diferente.
  9. No evalúe los núcleos con señales situadas en la periferia del núcleo.
  10. Contabilice solo los núcleos en los que se pueda realizar una enumeración clara; omita todos los demás.
  11. Realice un registro exacto. Vuelva a realizar un recuento para validar los recuentos dudosos.
fish-lab-quality-control-guidelines-for-single-color-enumeration.gif

 

 
 
 
 
Enumeración de dos colores

Dos o más sondas marcadas con fluoróforos de distinto color que se hayan hibridado en las mismas células se pueden enumerar de forma individual con juegos de filtros paso-banda único o de forma simultánea con juegos de filtros de varios paso-banda en función de la intensidad de la señal de las sondas y del tamaño del núcleo. Las células con núcleos pequeños o contraídos no se pueden enumerar fácilmente con los juegos de filtros de varios paso-banda debido a la disposición espacial de la señal de sonda en el núcleo o debido a las tenues señales de sonda percibidas.

  1. No evalúe las células que se toquen o estén superpuestas.
  2. Haga un recuento de las señales difusas si están separadas de otras señales.
  3. Contabilice las señales divididas (dos señales más pequeñas muy próximas) como una sola señal. Las dos señales representan un único complemento cromosómico.
  4. Contabilice dos señales conectadas por una hebra de fluorescencia como una única señal.
  5. No contabilice células sin ninguna señal a menos que estén rodeadas por núcleos que contengan señales.
  6. No evalúe los núcleos que no estén intactos.
  7. No evalúe los núcleos con señales superpuestas de diferente color.
  8. No contabilice las señales de hibridación inespecíficas. Estas señales se pueden recocer por su baja intensidad y por tener una forma diferente.
  9. No evalúe los núcleos con señales situadas en la periferia del núcleo.
  10. Contabilice solo los núcleos en los que se pueda realizar una enumeración clara; omita todos los demás.
  11. Realice un registro exacto. Vuelva a realizar un recuento para validar los recuentos dudosos.
 
 
 
 

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