Frotis de sangre para diagnóstico rápido mediante FISH

Los frotis de sangre se realizan en portaobjetos sin tratar, colocando una o dos gotas de sangre en el portaobjetos dependiendo de la densidad de la sangre. El frotis de la gota se realiza colocando el extremo de otro portaobjetos en ángulo y arrastrando rápidamente la gota hacia el extremo del portaobjetos de la muestra tan pronto como la sangre comience a extenderse la sangre a lo largo del borde del portaobjetos que se mantiene en ángulo. Un frotis de sangre idóneo solo cubre la mitad del portaobjetos y presenta una apariencia de pluma en la cola. Se deberían obtener dos portaobjetos por muestra con diferentes concentraciones de sangre. También se obtienen portaobjetos de una muestra control negativa. Los portaobjetos se etiquetan con el nombre de la muestra, el número de laboratorio y la fecha. Los portaobjetos se dejan secar en posición vertical durante 10-30 minutos.

Los eritrocitos se lisan poniendo los portaobjetos analizados en metanol:ácido acético recién preparado en una proporción de 1:1 durante 2 minutos tres veces. Los portaobjetos se dejan secar en posición vertical y luego se examinan en un microscopio de contraste de fases para determinar el número de células utilizables, la concentración celular y el área óptima para la hibridación. Los linfocitos aparecen como células redondas y brillantes en el contraste de fases y son las mejores células para usar en el análisis mediante FISH.

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