Procesamiento de muestras de amniocentesis

  1. Centrifugue 2-5 ml de muestra de líquido amniótico (LA) completo durante 5 minutos a 1000 rpm. La muestra no debe tener un aspecto sanguinolento o de color marrón. 
  2. Resuspenda el pellet en 2-5 ml de 1X tripsina/EDTA (0,05 % de tripsina, EDTA 4Na 0,53 mM en solución salina equilibrada de Hanks sin CaCl2, MgCl2 6H2O y MgSO4 7H2O) e incube en un baño de agua a 37 °C durante al menos 15 minutos.
  3. Centrifugue la suspensión durante 5 minutos a 1000 rpm.
  4. Resuspenda el pellet en 2-5 ml de KCl al 0,56 % e incube durante 20 minutos en un baño de agua a 37 °C.
  5. Añada 0,8-2 ml de fijador (metanol:ácido acético glacial 3:1) a las células/solución hipotónica y agite en el vórtex suavemente.
  6. Centrifugue la suspensión durante 5 minutos a 1000 rpm y resuspenda el pellet en 1 ml de fijador recién preparado. Conserve las muestras fijadas a 4 °C durante al menos 30 minutos o hasta que estén listas para llevar a cabo el procedimiento de FISH. Para la conservación a largo plazo, guarde las muestras fijadas a -20 °C en fijador.
  7. Antes de colocar las células en los portaobjetos, ajuste la suspensión celular según el tamaño del pellet de células. Si es necesario, especialmente después de un periodo prolongado de conservación (>1 mes), lave los pellets con fijador antes de la preparación del portaobjetos.
  8. Para preparar los portaobjetos para FISH, coloque la suspensión de células directamente en 1 o 2 portaobjetos de vidrio fríos, creando dos zonas de hibridación (15-25 µl de la suspensión celular por área).

 Siga con el kit de pretratamiento de FISH.

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