Ensayo RealTime HIV-1 Viral Load

Marcado CE

Para uso diagnóstico in vitro 

El ensayo Abbott RealTime HIV-1 es un ensayo in vitro de la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) para la cuantificación del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) en sangre completa sobre tarjetas como gotas de sangre seca (GSS) (es decir, obtenidas mediante venopunción o sangre capilar ) o plasma humano de individuos infectados con el VIH-1.

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Descripción
 

Rendimiento fiable a la hora de afrontar los retos del VIH

El ensayo Abbott RealTime HIV-1 proporciona:

  • Mayor precisión: gran rendimiento en la medición de viremia de nivel bajo
  • Seguimiento exacto: seguridad de que se detectan los cambios experimentados en el estado de la respuesta del paciente
  • Exclusivo diseño del ensayo: Una sonda parcialmente bicatenaria, una región diana altamente conservada y un perfil de temperatura específico garantizan una detección fiable de todos los grupos y subtipos

Afrontar los retos planteados por el VIH

El ensayo Abbott RealTime HIV-1 se ha diseñado para afrontar los retos que plantea el VIH:

La heterogeneidad genética del VIH-1 supone un desafío muy importante para el desarrollo de ensayos que puedan detectar y cuantificar de forma fiable los ácidos nucleicos del VIH-1. Aunque ciertos subtipos predominan en áreas específicas, hay estudios que indican que la propagación de los diferentes grupos y subtipos de VIH-1 está aumentando de manera global.

La diversidad del VIH-1 puede atribuirse a los siguientes factores:

  • Propensión a errores de la enzima transcriptasa inversa
  • Recombinación de subtipos
  • Transmisión entre especies 

¿Pequeñas elevaciones temporales o variación aleatoria del ensayo?

Una viremia de nivel bajo detectable que sigue a otra anterior por debajo del límite de detección o que no es detectable puede indicar:  

  • Un aumento real del nivel de carga vírica, como primer paso al desarrollo de la resistencia 
  • Pequeñas elevaciones temporales causadas por ejemplo por la liberación de virus de un reservorio 
  • Una medición de artefactos del ensayo, como variaciones aleatorias (imprecisión) alrededor del punto de decisión 

Cada resultado positivo de carga vírica del VIH-1 puede generar ansiedad tanto entre los médicos como entre los pacientes en cuanto a la idoneidad del tratamiento. En los casos en que dichos resultados se obtienen por variación aleatoria del ensayo, puede dar lugar a pruebas adicionales innecesarias.

El ensayo Abbott RealTime HIV-1 demuestra gran precisión alrededor del punto de decisión y minimiza el riesgo de un resultado de viremia de nivel bajo por variación aleatoria del ensayo.

Gráfico comparativo de cuantificación del ensayo Abbott RealTime HIV-1
El coeficiente de variación observado en muestras de pacientes con baja carga vírica (tres muestras de pacientes con carga viral por debajo de 100 copias/ml, con 10 replicados cada una) fue significativamente inferior con Abbott RealTime HIV (26 % - 31 %) que con un ensayo comparador (37 % - 59 %).
 

Detección de los subtipos y grupos del VIH-1

Se analizó un total de 90 muestras clínicas, diez de cada grupo M subtipo (A, B, C, D, CRF01-AE, F, CRF02-AG, G) y del grupo O, con el ensayo RealTime HIV-1 y con otros dos ensayos cuantitativos de VIH-1 aprobados, a los que se ha denominado comparador 1 (se ha utilizado la versión aprobada por la FDA) y comparador 2 (se ha utilizado la versión con marcado CE). Los números entre paréntesis indican el número de muestras que obtuvieron unos valores de cuantificación menores, en más de 1,00 log copias/ml si se compara con el ensayo RealTime HIV-1.

GRUPO/SUBTIPO N DETECTADOS CON REALTIME DETECTADOS CON COMPARADOR 1 DETECTADOS CON COMPARADOR 2
M/Subtipo A 10 10 10 (1) 10 (1)
M/Subtipo B 10 10 10 (0) 10 (0)
M/Subtipo C 10 10 10 (0) 10 (0)
M/Subtipo D 10 10 10 (0) 10 (0)
M/Subtipo AE 10 10 10 (0) 10 (0)
M/Subtipo F 10 10 10 (0) 10 (0)
M/Subtipo AG 10 10 10 (3) 10 (1)
M/Subtipo G 10 10 10 (2) 10 (1)
Grupo O 10 10 0 (NA) 7 (7)
N = número de muestras analizadas


Correlación con el ensayo comparador
Ensayo de correlación de Abbott RealTime HIV-1 con el comparador

Se analizó un total de 301 muestras recogidas de pacientes infectados con el VIH-1 con el ensayo RealTime HIV-1 en tres centros externos y con el método del comparador en un laboratorio central. Se analizaron los resultados de un total de 259 muestras que cayeron dentro del rango dinámico común del ensayo con el método de regresión lineal de Passing-Bablok. 

Uso previsto

El ensayo Abbott RealTime HIV-1 es un ensayo in vitro de la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) para la cuantificación del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) en sangre completa sobre tarjetas como gotas de sangre seca (GSS) (es decir, obtenidas mediante venopunción o sangre capilar ) o plasma humano de individuos infectados con el VIH-1. El ensayo Abbott RealTime HIV-1 está diseñado para su uso junto con el cuadro clínico y otros marcadores de laboratorio para el pronóstico de la enfermedad y como ayuda para evaluar la respuesta del virus al tratamiento antirretroviral según lo determinado por los cambios en los niveles de ARN del VIH-1 en plasma. Este ensayo no está diseñado para utilizarse como prueba de detección del VIH-1 en donantes ni como prueba diagnóstica para confirmar la presencia de infección por VIH-1.

Diseño
 

Filosofía del diseño

La combinación exclusiva de las características del diseño del ensayo Abbott RealTime HIV-1 garantiza la detección fiable de todos los grupos y subgrupos del VIH-1 con un alto grado de precisión.

Características del diseño del ensayo Abbott RealTime HIV-1
 

Rendimiento preciso en la medición de viremia de nivel bajo

Calibración externa precisa: Las características del diseño de este ensayo permiten usar la calibración externa en dos puntos para una cuantificación precisa y exacta. 

Calibración externa del ensayo Abbott RealTime HIV-1

La utilidad de la curva de calibración externa reduce la variabilidad del cálculo de carga viral en comparación con una calibración interna, ya que no existen efectos competitivos en la reacción de PCR. La variación aleatoria del ensayo queda minimizada, por lo que da como resultado una cuantificación vírica muy exacta en el punto de decisión clínica y da confianza en la respuesta del paciente al tratamiento.
 

Diana de cebadores y sonda

Los cebadores y la sonda están dirigidos a la región de la integrasa del gen de la polimerasa. La selección de la región diana conservada (región de la integrasa del gen de la polimerasa) fue facilitada por el programa de vigilancia global del VIH de Abbott. El ensayo Abbott RealTime HIV-1 sigue demostrando la capacidad de tolerar mutaciones sin ningún impacto en el rendimiento del ensayo. 

Región diana conservada del ensayo Abbott RealTime HIV-1

La región de la integrasa del gen de la polimerasa es una región conservada del genoma del VIH-1.
 

Diseño de la sonda parcialmente bicatenaria

Diseño exclusivo de la sonda:  una nueva clase de sonda, la sonda parcialmente bicatenaria, desarrollada por Abbott permite una cuantificación exacta en las dianas genéticamente polimórficas.

Diseño de la sonda del ensayo Abbott RealTime HIV-1

Mayor longitud - mayor tolerancia a emparejamientos incorrectos: en ausencia de diana, la sonda hibrida con el oligonucleótido atenuador, impidiendo que se genere la señal fluorescente.
 

Diseño de la sonda del ensayo Abbott RealTime HIV-1

En presencia de diana, la sonda prefiere hibridar con la secuencia diana, disociándose del oligonucleótido atenuador y permitiendo la detección de fluorescencia.
 

Condiciones de los ciclos: Ciclos de lectura a baja temperatura

Condiciones óptimas de los ciclos: El diseño exclusivo de la sonda garantiza la optimización de las condiciones de los ciclos, que incluye la lectura a baja temperatura, lo que contribuye a la tolerancia a emparejamientos incorrectos.

Ciclos de lectura a baja temperatura del ensayo Abbott RealTime HIV-1

 
Especificaciones
 
 
 
Abbott RealTime
HIV-1
Plasma Sangre completa (GSS)
Sensibilidad 40 copias/ml para un volumen de muestra de 1,0 ml
40 copias/ml para un volumen de muestra de 0,6 ml
75 copias/ml para un volumen de muestra de 0,5 ml
150 copias/ml para un volumen de muestra de 0,2 ml
839 copias/ml (una gota, 70 ul)
Intervalo lineal 40 copias/ml (1,6 log copias/ml) a 10 millones de copias/ml (7,0 log copias/ml) LDD hasta 7 log copias/ml
Especificidad 100 %* ≥ 99,5 %
Región diana Región de la integrasa del gen de la polimerasa Región de la integrasa del gen de la polimerasa
Detección de subtipo Grupo M subtipos A-H, grupo O y grupo N Grupo M subtipos A-H, grupo O y grupo N
Control interno ARN de calabaza no competitivo, añadido al tampón de lisis durante la extracción ARN de calabaza no competitivo, añadido al tampón de lisis durante la extracción
Estandarización Virology Quality Assurance (VQA) Laboratory (Laboratorio de aseguramiento de la calidad en virología) del primer estándar internacional de la Organización Mundial de la Salud (OMS) del AIDS Clinical Trial Group (Grupo de ensayo clínico del SIDA) para el ARN del VIH-1 (97/656) Virology Quality Assurance (VQA) Laboratory (Laboratorio de aseguramiento de la calidad en virología) del primer estándar internacional de la Organización Mundial de la Salud (OMS) del AIDS Clinical Trial Group (Grupo de ensayo clínico del SIDA) para el ARN del VIH-1 (97/656)
Tipo de muestra Plasma (ACD-A y EDTA) Una gota de sangre completa
Círculo de GSS de 12 mm (1/2")
Volumen de entrada 0,2 ml; 0,5 ml; 0,6 ml; 1,0 ml 70 ul añadido a círculo de GSS
(12 mm)
Preparación de la muestra m2000sp, m24sp y manual m2000sp
*Se evaluó la especificidad del ensayo RealTime HIV-1 en tres centros externos analizando 514 muestras de plasma VIH-1 seronegativas de donantes de sangre voluntarios. No se detectó ARN del VIH-1 en las 514 muestras y se calculó que la especificidad del ensayo RealTime HIV-1 era del 100 % (514/514), (IC del 95 % 99,28 al 100 %).

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