Fehlerbehebung bei Paraffinschnitten

  1. Sicherstellen, dass die Temperatur des 80 °C heißen, zirkulierenden Wasserbads konstant bleibt. Schwankungen bei dieser Temperatur können zu schlechten Ergebnissen führen. Polypropylenkugeln zur Oberflächenisolierung sind bei VWR erhältlich, Bestellnr. 26396-466.

    Erneute Bearbeitung desselben Objektträgers:
  2. Deckglas abnehmen und die Objektträger durch die Ethanolreihe (70, 85, 100 %) führen, jeweils 1 Minute lang. Objektträger trocknen lassen und weitere 10 bis 45 Minuten lang in die Proteaselösung geben, je nach Ausmaß der Verdauung. Objektträger nicht erneut durch die Formalinfixierung führen. Bei 73 °C erneut 6 Minuten lang denaturieren und über Nacht bei 37 °C hybridisieren. Unter extremen Bedingungen müssen Sie eventuell erneut vorbehandeln. Beginnen Sie mit 80 °C heißem Natriumthiocyanat und beenden Sie den Vorgang nach der Denaturierung in der Proteaselösung und erneuten Hybridisierung.
  3. Wenn Abschnitte nicht 24 bis 48 Stunden lang mit Formalin fixiert werden, gestaltet sich die richtige Verdauung sehr schwierig.
  4. Vergewissern Sie sich, dass der pH-Wert der Protease-Pufferlösung 2 beträgt. Falls nicht, passen Sie den pH-Wert an und das Enzym wird wieder aktiv.
  5. Stellen Sie sicher, dass der Proteasepuffer vor dem Hinzufügen der Protease auf 37 °C erwärmt wurde.
  6. Paraffineingebettete Schnitte 2 Minuten lang bei 72 °C in 2x SSC/0,3 % NP-40 spülen. Eine nachfolgende Spülung bei Umgebungstemperatur wird nicht empfohlen.
  7. Wenn die Vorbehandlung immer noch nicht funktioniert, ist eventuell eine stärkere Vorbehandlung erforderlich. Bitte wenden Sie sich an Ihre Kundendienstvertretung vor Ort.

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