Sequenzielle FISH

Wenn die FISH-Ergebnisse ungenügend sind, können Objektträger unabhängig von der Ursache in den meisten Fällen mit einem neuen Sondengemisch erneut hybridisiert werden. Wenn die Sonde direkt gekennzeichnet wird, kann dieselbe oder eine andere Sonde verwendet werden.  

Die Bedingungen hängen von den Proben des peripheren Bluts ab.

  1. Mit einer Pinzette das Deckglas vorsichtig von den bereits hybridisierten Zielen abnehmen.
  2. Zum Dehydrieren die einzelnen Objektträger bei Raumtemperatur nacheinander jeweils 1 Minute in Ethanolspüllösungen von 70 %, 85 % und 100 % eintauchen. Die Objektträger lufttrocknen lassen. Anschließend sind die Objektträger bereit für eine erneute Hybridisierung. Es wird empfohlen, die Denaturierungsdauer für die Objektträger auf ca. 50 % der ursprünglichen Denaturierungsdauer zu verkürzen, jedoch nicht auf weniger als 3 Minuten. Bei weiteren Wiederholungshybridisierungen muss die Denaturierungsdauer nicht weiter verkürzt werden.

Die Intensität der Gegenfärbung nimmt mit jeder weiteren Hybridisierung ab, der Verlust ist jedoch minimal. Es ist möglich, die Hybridisierung in der gleichen Metaphase mit verschiedenen Sonden bis zu 8 Mal zu wiederholen.

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