MultiVysion® PGT: erforderliche Reagenzien

MultiVysion® PGT: erforderliche Reagenzien

Das Kurzprotokoll ist kein Ersatz für die Packungsbeilage.

 

Die Sonden werden in einem Hybridisierungspuffer vorgemischt.  Pro Zielbereich werden 3 µl verwendet. 

 

Hinweis: Die empfohlene maximale Hybridisierungszeit beträgt 8 Stunden, optimal sind jedoch 4 Stunden. Längere Hybridisierungszeiten können dazu führen, dass die Zellkerne sehr intensiv gefärbt und die Sondensignale in der Folge unkenntlich werden.

 

Erforderliche Allzweckreagenzien, die nicht im Lieferumfang enthalten sind

multivysion-pgt-reagents-required-table.gif

Ein Protokoll zur Vorbereitung humaner Blastomerenzellen für das FISH-Verfahren finden Sie im Abschnitt zur Sondenvorbereitung.

 
 
 
 
Ergebnisbetrachtung

Wie gut sich die Ergebnisse der MultiVysion® Hybridisierung betrachten und auswerten lassen, hängt in hohem Maße davon ab, dass die richtigen Filtersets und ein ordnungsgemäß ausgerichtetes Fluoreszenzmikroskop verwendet werden. Einige der für die Betrachtung oder Bildgebung der MultiVysion PB Ergebnisse erforderlichen Filtersets sind in Ihrem Labor möglicherweise nicht verfügbar. Wenden Sie sich für weitere Informationen zu den Filterset-Spezifikationen an den technischen Kundendienst von Vysis. Alle Filtersets können von Vysis Inc. erworben werden. 

 

Die folgenden Filterset-Mindestanforderungen werden für die Betrachtung der MultiVysion PGT Ergebnisse empfohlen:

 

1) Doppelbandpass-Filterset (Blau/Aqua)

 

2) Doppelbandpass-Filterset (Grün/Rot)

 

3) Einzelbandpass-Filterset, (Gold (Gelb))

 

4) Einzelbandpass-Filterset (Aqua, v2) (Option für die Klärung von Signalen, die mit dem blauen/aquafarbenen Doppelbandpass-Filterset beobachtet werden, falls die blauen und die aquafarbenen Sondensignale nur schwer unterscheidbar sind)

 

Vorgehensweise zur Betrachtung der Hybridisierungsergebnisse:

  1. Unter dem Phasenkontrastmikroskop mit einer geringen Vergrößerung (100x) und unter Verwendung der zuvor notierten Koordinaten die Zielzelle lokalisieren.
  2. Nach der Lokalisierung der Zelle den Objekttisch des Mikroskops nicht mehr bewegen und anschließend für die Fluoreszenzbetrachtung zum aquafarbenen Einzelbandpass-Filterset wechseln und bei geringer Vergrößerung (100x) die Zelle erneut lokalisieren. Zur Auswertung nach der erneuten Lokalisation der Zelle unter Fluoreszenzlicht zu einer hohen Vergrößerung (1000x) wechseln. Je nach den für die Auswertung verwendeten Filtersets die Betrachtungssequenz A oder B befolgen. 

A. Wenn für die Auswertung der mittels SpectrumAquaTM und SpectrumBlueTM markierten Sonden das aquafarbene/blaue Doppelbandpass-Filterset verwendet wird, die folgenden Lokalisierungs- und Auswertungsschritte befolgen: 

    • Unter Verwendung des aquafarbenen/blauen Doppelbandpass-Filtersets die Zelle lokalisieren.
    • Gemäß der folgenden Filtersequenz jede der anderen Sonden auswerten:

1) Doppelbandpass (Aqua/Blau)

 

2) Doppelbandpass (Grün/Rot)

 

3) Einzelbandpass (Gold (Gelb))

 

Hinweis: Zur Minimierung der Photobleichung wird empfohlen, die Probe gemäß dieser Sequenz zu betrachten. Diese Sequenz sorgt dafür, dass die empfindlicheren Fluorophore dem Licht zuerst ausgesetzt werden.

 

B. Wenn für die Auswertung Einzelbandpass-Filtersets verwendet werden, die folgenden Lokalisierungs- und Auswertungsschritte befolgen:

    • Unter Verwendung des aquafarbenen/blauen Einzelbandpass-Filtersets die Zelle lokalisieren.
    • Gemäß der folgenden Filtersequenz jede der anderen Sonden auswerten:

1) Einzelbandpass (Blau)

 

2) Einzelbandpass (Rot)

 

3) Einzelbandpass (Gold (Gelb))

 

4) Einzelbandpass (Grün) 

 

5) Einzelbandpass (aqua)

 
 
 
 

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